分子生物学试题
酸替代时可能是由于哪些单碱基的置换? ---(分析题)
下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是( ) ---(选择题)
限制性内切核酸酶的星号活性是指：( ) ---(选择题)
一种野生型E.coli菌株的一种蛋白质的108位为Val残基，分离出三种突变体(A，B和C)发现它们在这个位置分别是G1y，G1u和Leu。 A和B的回复突变株中这个位置上的氨基酸分别是Trp和Lys，突变C没有做进一步的实验，解释上述结果并推 测六种菌株中该位置上的密码。 ---(分析题)
上题中A，B和C中哪两个菌株的杂交将会由于108位密码内的交换而产生野生型 重组体? ---(分析题)
下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( ) ---(选择题)
DNA被某种酶切割后，电泳后得到的电泳带有些扩散，下列原因中，那一项不 太可能?( ) ---(选择题)
在一个体外蛋白翻译系统，po1y(UC)可被翻译成由Phe和Cys组成的蛋白，但其中没有Ala。1962年Chapeville用拉内镍（Raney nickel）处理携带Cys的tRNA，削弱了Cys与Ala的连接，当这种被改变的氨酰tRNA用于体外系统中时，Ala能掺入蛋白中，解释该结果的重要性。 ---(分析题)
关于回文序列，下列各项中，( )是不正确的 ---(选择题)
关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当 ---(选择题)
为什么说基因工程技术是60年代末70年代初发展起来的? ---(简答题)
重组DNA的含义是什么? ---(简答题)
如何理解基因工程的两个特点? ---(简答题)
在Cohen构建有生物功能重组体的第一步实验中，用EcoRI切割了R6—5质粒，然后转化E.coliC600，在卡那霉素抗性平板上筛选到了pSCl02，它是由R6—5的三个EcoRI片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性? ---(简答题)
什么是动物乳腺生物反应器? ---(简答题)
S.N Cohen于1973年构建了三个重组体，pSCl02，pSCl05，pSCl09请说明这三个重组体是如何获得的?各说明了什么? ---(问答题)
基因克隆是如何使含有单个基因的DNA片段得到纯化的? ---(问答题)
遗传工程 ---(概念题)
生物技术 ---(概念题)
基因工程 ---(概念题)
细胞工程 ---(概念题)
细胞分泌工程 ---(概念题)
酶工程 ---(概念题)
蛋白质工程 ---(概念题)
发酵工程 ---(概念题)
移动基因 ---(概念题)
断裂基因 ---(概念题)
重叠基因 ---(概念题)
假基因 ---(概念题)
现分离到X 82噬菌体的一个突变型，它同野生型的噬菌斑相当不同，并已分离到这两种噬菌体的DNA，请设计一个实验，初步鉴定是点突变?插入突变还是缺失突变? ---(简答题)
说明Sanger DNA测序法的原理。 ---(简答题)
在酶切反应缓冲液中加入BSA的目的是什么?机理是什么？ ---(简答题)
Fredrick和McClarin等用一个由13个碱基对的DNA片段与EcoRI反应，然后分离到酶和DNA共结晶的复合物，通过X射线分析发现了什么? ---(简答题)
有些噬菌体和质粒常常编码一些抗限制性酶的蛋白以中和宿主的限制系统。你认为噬菌体和质粒还有哪些可能的方式避免宿主的限制作用? ---(简答题)
某学生在EcoRI切割外源片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因? ---(简答题)
在序列5’-CGAACATATGGAGT-3’中含有一个的6bp的II类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么? ---(简答题)
下面几种序列中你认为哪一个（一些)最有可能是II类酶的识别序列： GAAGCG，AAATTT，GATATC，ACGGCA？为什么? ---(简答题)
用连接酶将Sau3AI(¯GATC)切割的DNA与经BamHI(G¯GATCC)切割的DNA连接起来后，能够被BamHI切割的机率有多大(用百分比表示)? ---(简答题)
用Klenow酶填补的办法可使5’粘性末端转变成平末端。这种方法常使DNA上的某些限制酶的识别位点消失。请问，对于下列限制酶，用这种方法处理会不会使它们的识别序列都消失？BamHI(G¯GATCC)；Taq I(T¯CGA),BssH II(G¯CGCGC)。 ---(简答题)
请推测细菌的染色体上是否会有编码识别8个碱基的内切酶?怎样验证? ---(简答题)
当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施? ---(简答题)
什么是细菌的限制—修饰系统(restriction-modification system, R-M system) ---(问答题)
细菌的限制-修饰系统有什么意义? ---(问答题)
说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。 ---(问答题)
I类限制酶具有哪些特点?在基因工程中有什么作用? ---(问答题)
III类限制酶有哪些特点? ---(问答题)
何谓限制性内切核酸酶的切割频率?。 ---(问答题)
什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响? ---(问答题)
双酶消化法(double digests)绘制限制性内切核酸酶酶谱的原理。 ---(问答题)
什么是DNA多态性(DNA polymorphism)? ---(问答题)
限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)。 ---(问答题)
计算下列三种酶各自在某染色体DNA序列上识别位点问的平均距离. Alu I： 5’AGCT 3’ EcoRI： 5’GAATTC 3’ 3’TCGA 5’ 3’CTTAGG 5’ Acy I: 5’GPuCGPyC 3’ 3’CPyGCPuG 5’ (注：Py；任何一种嘧啶；Pu：任何一种嘌呤) ---(问答题)
在细菌质粒pBPl的四环素抗性基因tetR的中间有一个HindII的切点。用HindIII切割果蝇基因组DNA，以pBPl为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆15带有果蝇的目的基因。用HindIII和EcoRV对克隆15进行了酶切分析，电泳结果如图15．1(用酶切的pBPl质粒DNA作对照)，旁边标出了片段的大小。 (1)绘制含有插入片段和不含插入片段时的pBPl的限制性图谱，并标明四环素抗性 基因的位置； (2)如果用克隆在另一个与pBPl完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针，进行Southern印迹杂交，预测上述电泳图会出现什么样的杂交带? (3)如果用克隆15的果蝇DNA片段作为探针进行Southern印迹杂交，放射自显影的结果又是如何? ---(问答题)
为什么大多数内切酶被称为“限制性内切酶。 ---(问答题)
据Science杂志报道：一种重要的遗传疾病可由导致DNA中碱基替换的诱变剂在体外进行人工诱导。设计一种快速用以鉴定疾病基因型的检测方法。 ---(问答题)
为了绘制长率3.0kbBamHI限制性片段的限制性图谱，分别用EcoRI、HpaII、EcoRI+HpaII、消化这一片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离DNA片段，溴化乙锭染色后观察DNA带型(图15．2)。请根据这些结果，绘制一个限制性图谱，要标明EcoRI、HpaII识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离(kb)。 ---(问答题)
会文序列 ---(概念题)
同列酶 ---(概念题)
限制性物理图谱 ---(概念题)
按适当的顺序，列出将一种mRNA的cDNA克隆到表达载体所用到的酶. ---(简答题)
为什么反转录酶在聚合反应中会出错? ---(简答题)
什么是测序酶(sequenase)? ---(简答题)
什么是S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)? ---(简答题)
基因工程中，为什么不喜欢用BAP来脱去DNA的5’端的磷酸基团? ---(简答题)
RNaseA和RNaseH在催化活性和应用上有何不同? ---(简答题)
切口移位(nick translation)标记DNA前，用DNaseI处理DNA时，应注意什么? ---(简答题)
核酸酶与外切核酸酶Ⅲ用于系列缺失突变有什么不同? ---(简答题)
1967年，有5个实验室几乎同时独立发现了DNA连接酶，每个实验室的实验有什么特点? ---(问答题)
简述DNA和RNA连接酶的催化反应机制。 ---(问答题)
影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些? ---(问答题)
什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用? ---(问答题)
如何利用T4DNA聚合酶制备3’隐含末端或双链平末端? ---(问答题)
如何利用T4DNA聚合酶进行双链DNA的3’末端标记? ---(问答题)
如何利用T4DNA聚合酶制备平末端? ---(问答题
反转录酶有两种类型，一是来源于禽类骨髓母细胞瘤病毒(AMV,avian myeloblastosis virus)，另一种来源于鼠类莫洛尼氏白血病毒(M-MLV,)，它们之间有什么不同? ---(问答题)
与E.coli RNA聚合酶相比，细菌噬菌体的SP6RNA聚合酶、T7RNA聚合酶和T3RNA聚合酶具有哪些优越性? ---(问答题)
什么是多核苷酸激酶的向前反应和交换反应? ---(问答题)
细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途? ---(问答题)
外切核酸酶(1amba exonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么应用? ---(问答题)
Mn2+Mg2+对DNaseI的活性有什么影响?DNaseI在基因工程中有什么作用? ---(问答题)
比较S1-Mapping和Footprinting在原理上、方法上、应用上有何不同? ---(问答题)
1， 连接酶(ligase)是一类用于核酸分子连接形成( )键的核酸合成酶，有DNA连接酶和RNA连接酶之分. ---(填空题)
原核生物主要有两种类型的DNA连接酶：E.coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。基因工程中使用的主要是T4DNA连接酶，它是从T4噬菌体感染的E..coli中分离的一种单链多肽酶，分子量为。（ ）kDa,由T4噬菌体基因( )编码.。E.coli DNA连接酶是由大肠杆菌基因( )编码，也是一条多肽链的单体，分子量为( )kDa。这两种DNA连接酶有两个重要的差异：第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同，T4DNA连接酶用( )。E.coli DNA连接酶则用( )作为能源。第二是它们催化平末端连接的能力不同，在正常情况下只有T4DNA连接酶能够连接平末端，E.coli DNA连接酶则不能。即使是调整反应条件，E.coli DNA连接酶催化平末端的连接效率也只有T4DNA连接酶的( )。 ---(填空题)
YAC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性? ---(简答题)
DNA连接酶的单位通常用Weiss单位表示，一个Weiss单位是：（ ） ---(填空题)
列举质粒载体必须具备的4个基本特性。 ---(简答题)
DNA聚合酶I是（ ）在1９６5年从大肠杆菌细胞中分离的，所以又称为（ ）聚合酶。该酶由大肠杆菌基因（ ）编码，是一种单链球蛋白。分子量为1０９kDa，酶蛋白中含有一个zn原子。 ---(填空题)
什么叫穿梭载体? ---(简答题)
Ｔ４DNA聚合酶与Klenow酶一样，具有5’→3’聚合酶和３’→５’外切酶两种活性，但是它的３’→５’外切酶的活性比Klenow酶强( )倍。该酶的３’→５’外切活性既能作用于单链DNA也能作用于双链DNA，不过作用于( )链的活性要强于( )链。 ---(填空题)
反向转录酶(reverse transcriptase)是由( )kDa和( )两个亚单位成的二聚体，作用时以RNA为模板合成DNA。 ---(填空题)
从小牛胸腺中分离纯化的末端转移酶催化的基本反应是将（ ）同时释放出游离的无机磷。催化反应时不需（ ），但需要引物，单链DNA是最好的引物，单链DNA受体的长度最短需有（ ）个dNTP。具有3’突出末端的双链DNA也是较好的反应底物。二价离子和DNA末端状态对催化反应影响较大，但是用（ ）作为辅助离子，可以催化任何形式的末端(突出的、隐含的、平齐的)加接单核坩酸，但突出的3’端效率较高。 以Mn2+/Mg2+作为辅助因子，只能在单链DNA或双链DNA的3’突出端加尾。 ---(填空题)
说明减少质粒和噬菌体载体上某种酶的识别位点的方法和原理。 ---(简答题)
虽然质粒的带动转移给质粒载体的安全性带来一定的困难，但是通过带动转移将质粒转移到特定的受体菌中也是基因工程中常用的实验技术。请举一例说明之。 ---(简答题)
S1核酸酶(S1nuclease)是从米曲霉(Aspergillus oryzae)中分离纯化的一种含( )金属蛋白，分子量为32kDa，是一种耐热的酶(37—65℃). ---(填空题)
为什么来自Hfr×F‐的重组体几乎总是F‐? ---(简答题)
解释为什么不同的Hfr菌株具有不同的转移起点和方向? ---(简答题)
在Ｓ１保护实验中，Ｓ１切割的温度有两种：２０℃和４５℃，这是因为：在２０℃时（ ）；在４５℃时（ ） ---(填空题)
（ ）技术可以用来鉴定ＤＮＡ分子中与ＤＮＡ结合蛋白相互作用的特异序列。 ---(填空题)
怎样从一个E.coli的Hfr菌株中分离到一个F′gal+的菌株? ---(简答题)
真核生物有两种ＤＮＡ连接酶，连接酶Ｉ主要是参与（ ），而连接酶ＩＩ则是参与（ ）。 ---(填空题)
X染色体的失活是一种独特的发育调控机制，它关闭了整个染色体上的所有基因的表达。在人类X染色体中，失活作用涉及到1.5×108以上的碱基对和几千个基因。在女性中，两条X染色体中的任何一条失活所造成的X连锁基因的表达与正常男性单个X染色体上基因表达的结果是相同的。虽然失活的机理仍不了解，一般认为失活作用是在染色体的特定区域即X失活中心开始的，然后扩散到染色体的其他部分。虽然失活染色体上的大多数基因被关闭了，但少数仍有活性，因此，可以推测X的失活作用X连锁基因的表达模式有关。为了验证这种推测，分离了大量的人的X染色体基因的cDNA并用Northern印迹法检查它们的表达。比较了这些基因在X染色体正常的男性和女性细胞中的表达,在X染色体异常的男性和女性个体中的表达,以及在啮齿动物：人细胞杂交株中的表达，这种杂交株保留了一个失活的人的X染色体(Xi)或是一个有活性的人X染色体(Xa)。在四种cDNA中，发现了三种表达模式，A,B,C三种cDNA示于图22．4。 (1)指出每一种表达模式中表达的基因是来自于活性染色体、非活性染色体，还是二者都有。哪一种是最普遍的，哪一种是最特殊的? (2)根据不正常个体细胞的结果，归纳出一条规律以说明在X染色体失活过程中，有多少染色体被失活，多少保留活性。 ---(分析题)
许多引起人遗传病的突变都是由单个核苷酸的取代而造成的。寡聚核苷酸的连接作用可提供一个快速检测单个核苷酸差异的手段。这种分析方法要使用成对的寡聚核苷酸： 其中一个被生物素标记，另一个具有放射性标记或荧光标记，图22．5B的一对寡聚核苷酸是为了检测镰形细胞白血病(图22．5A)而设计的。在分析过程中，分别将不同个体的DNA在有DNA连接酶的存在下，两两配对进行寡聚核苷酸杂交。将生物素酰化的寡聚核苷酸结合到固相支持物的抗生物素链霉蛋白上，然后通过放射自显影检查杂交结果，如图22．4C所示。 (1)你认为βA与βS寡聚核苷酸会同时与杂交吗? (2)这种分析是怎样区别βAβS DNA的? ---(分析题)
RFLP能够用于跟踪特定染色体区域的遗传。在一定的条件下，可用靠近缺陷基因 的 RFLP来测定末出生胎儿是否有基因缺失。一对夫妇来进行遗传咨询，他们的第二个孩子出生后不久死于一种遗传性疾病，母亲又一次怀孕了。已天折的孩子是家系中受此遗传病影响的第二例，另一例是孩子奶奶(父亲的妈妈)的一个兄弟。这对夫妇想知道这次所怀的孩子是否也有这种遗传病。你已经研究过这种病的遗传性，并且知道是由常染色体的隐性基因所引起。在这种致病基因所处的染色体区内，发现整个人群中有几个限制性位点的多态性， 如图22．6A所示， 多态性位点用符号+/-表。你分离了双亲、祖父母、以及正常孩子的DNA样品，并用限制性图谱来分析它们的特性，结果示于图22．6B。现在开始检测胎儿，请预测什么样的限制性酶切结果表明很可能具有遗传病? ---(分析题)
你打算将一个具有末端的DNA片段克隆到具有BamH I 末端的载体中。问题是BamH I和Kpn I的末端是不匹配的，BamH I 是5’突出端，Kpn I则是突出的3’ 端(图22.7)。一位朋友建议用图22.7所示的寡聚核苷酸“片段”来进行连接。你并没有马上意识到达种方法是可行，因为你想到的连接作用需要邻近的5’磷酸和3’羟基。虽然寡聚核苷酸分子被限制性内切核酸酶切割后会产生合适的末端，但是，合成的寡聚核苷酸的末端都是羟基。另外，虽然图22．7中接头是及BamH I— Kpn I ，但另一个接头却是Kpn I—BamH I，你怀疑相同的寡聚核苷酸是否能够适合这两种方式的连接。 (1)画出Kpn I—BamH I结合体和所需要的寡聚核苷酸片段的图，这种寡聚核苷酸与图22.7所示的是否相同? (2)画出用连接酶处理过的分子图，指明被连接的缺口。 (3)你朋友的图解方法有效吗? ---(分析题)
λ噬菌体的基因组DNA为（）kb，有（）个基因。在体内，它有两种复制方式，扩增时（早期复制）按（）复制，成熟包装（晚期复制）则是按（）复制。它有一个复制起点，进行（）向复制。λ噬菌体的DNA既可以以线性存在又可以以环状存在，并且能够自然成环。其原因主要是在λ噬菌体线性DNA分子的两端各有一个（）个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的黏性末端部位叫做（）位点。 ---(填空题)
根据噬菌体的包装能力，将野生型λ噬菌体的基因组DNA改造成插入型载体，该载体的最小分子大小约为（）kb,插入的外源片段最大不超过（）kb。 ---(填空题)
野生型M13不适合用作基因工程载体，主要原因是（）和（）。 ---(填空题)
黏粒（cosmid）是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自（）、cos位点来自（），最大的克隆片段达到（）kb。 ---(填空题)
有两类改造型的λ噬菌体载体，即插入型和取代型。从酶切点看，插入型为（）个，取代型为（）个。 ---(填空题)
野生型λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是（）、（）和（）。 ---(填空题)
M13单链噬菌体的复制分为三个阶段：（）、（）和（）。 ---(填空题)
噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是（），而来自噬菌体的主要结构是（）。 ---(填空题)
你已经分离了一个新的F′因子，怎样用最简便的方法知道最初的F因子的部分DNA已经被切除，并被一个外源DNA(也就是细菌DNA)所替代? ---(简答题)
Ｔ４ＲＮＡ连接酶是１９７２年发现的，并于１９７７年纯化。该酶是由Ｔ４噬菌体基因（ ）编码，作用是不需要模板。它在体内的作用是参与Ｔ４噬菌体（ ）它不参与ＤＮＡ合成的连接，但在（ ）中有可能。 ---(填空题)
你能用哪一种基因转移的方法确定 (1) E.coli染色体上一个新发现的基因座在其染色体上的位置； (2)一个新分离的突变在基因内的位置。 ---(简答题)
ＤＮＡ聚合酶Ｉ的 Klenow大片段是用（ ）切割ＤＮＡ聚合酶Ｉ得到的分子量为７６ｋＤａ的大片段，具有两种酶活性（１）：（ ）；（２）：（ ）的活性。 ---(填空题)
反向转录酶除具有以DNA和RNA为模板合成DNA的5’→3’合成酶的活性外还具有4中酶的活性（1）：（ ）；（2）：（ ）；（3）：（ ）；（4）：（ ）。 ---(填空题)
RNA连接酶作用是除需要ATP和Mg2+，还需要（ ） ---(填空题)
用加有注释的图表说明F质粒是怎样从一个F+细胞转移到F—细胞。并简要说明转移复制如何不同于营养体的复制。 ---(简答题)
DNA聚合酶I是一种单体酶，分子量为109kDa它含有金属离子（ ）。 ---(填空题)
什么是复制子(replicon)? ---(问答题)
为了防止DNA的自身环化，可用（ ）脱去双链DNA（ ）。 ---(填空题)
T4单核苷酸激酶进行DNA片段5’端标记时，主要是通过两种反应即（ ）和（ ）。 ---(填空题)
什么是质粒的相容性?什么是不相容群?机制是什么? ---(问答题)
什么是质粒的带动转移? ---(问答题)
CIP催化脱磷酸时有两种最适温度，一种是37℃，适用于（ ）端脱磷酸；另一种是56℃，适用于（ ）端脱磷酸。 ---(填空题)
说明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。 ---(问答题)
λ外切核酸酶可丛双链DNA的5’端依次切下5’单核苷酸，但对不同末端的底物来说，作用效率不同，（ ）最高，（ ）最低。 ---(填空题)
Co1E1衍生质粒拷贝数调节机理的机理是什么? ---(问答题)
EGTA是（ ）离子螯和剂。 ---(填空题)
测序酶是修饰了的T7DNA聚合酶，它只有（ ）酶的活性，而没有（ ）酶的活性。 ---(填空题)
切口移位（nick translation）法标记DNA的基本原理在于利用（ ）的（ ）和（ ）的作用。 ---(填空题)
R1质粒拷贝数受到怎样的调节控制? ---(问答题)
欲将一具有突出单链末端的双链ＤＮＡ分子转变成平末端的双链形式通常可采用（ ）或（ ）。 ---(填空题)
反转录酶除具有催化ＤＮＡ的合成外，还具有（ ）的作用，可将ＤＮＡ－ＲＮＡ杂种双链中的（）水解掉。 ---(填空题)
T4DNA 连接酶和 E.coli连接酶都能催化平末端和黏末端的连接。 ---(判断题)
质粒如何维持在细胞中的稳定? ---(问答题)
T4DNA 连接酶和 E.coli连接酶都能催化双链DNA和单链DNA的连接。 ---(选择题)
引起质粒不相容性的主要原因是什么? ---(问答题)
反转录酶能够以单链DNA或单链RNA为模板，在引物的引发下合成一条互补的DNA链DNA链。以RNA为模板合成的DNA是互补DNA(complementary DNA，cDNA)。若是以DNA模板合成DNA，dNTP的掺入速度很低(约5个核昔酸／秒)，比T7DNA聚合酶的合成速度差不多低100倍。 ---(判断题)
以RNA为模板，用反转录酶可同时产生单链和双链的cDNA，双链DNA是由自身引物引导合成。但这种自身引物引导的合成效率远低于外加寡核反苷酸引物引导的合成。 ---(判断题)
由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面? ---(问答题)
Bal31核酸酶(Ba131 nuclease)是Ca2+依赖性的，在反应混合物中加入EDTA便可抑制它的活性o ---(判断题)
请指出质粒pSCl01的一些生物学特性(包括结构和遗传)及在基因工程中的作用。 ---(问答题)
λ外切核酸酶不能在双链DNA的gap和nick处切割DNA。 ---(判断题)
自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是Co1E1和pSCl01这两个自然 质粒也不尽人意，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本内容? ---(问答题)
当一个DNA结合蛋白同它识别的核苷酸序列结合以后，就保护了它们的磷酸二酯 键免遭切割，其结果，电泳胶上就有明显可见的空缺带(与对照相比)，这就是DNA足迹法。 ---(判断题)
T4 DNA连接酶和E.coli连接酶作用时都需要ATP和NAD+作为辅助因子。 ---(判断题) 多核苷酸激酶之所以能够用于DNA片段的标记，是因为它能够将单个的32P标记的单核苷酸加到每一DNA链的5’端。 ---(判断题)
质粒改造的发展过程如何? ---(问答题)
在反转录过程中，·使用AMV比使用M-MLV可得到较多的产物。 ---(判断题)
在质粒中如何增减酶切点? ---(问答题)
真核生物可能有两种DNA连接酶，连接酶I和连接酶II都能在DNA合成和连接中起作用。 ---(判断题)
DNA聚合酶I有三种酶活性，其中3’→5’外切核酸酶的活性在较多的dNTP存在 下，常被5’→3’合成酶的活性所掩盖。 ---(判断题)
有人用限制性内切核酸酶EcoR I分别切割松弛型质粒Co1E1和严紧型质粒pSCl01(各有一个切点)，然后重组连接形成一个杂种质粒pSCl34，请推测这种质粒有什么特性和用途。 ---(问答题)
用同一种酶切割载体和外源DNA得到黏性末端后，为防止它们自身环化，要用CIP 将它们脱磷酸。 ---(判断题)
λ外切核酸酶的作用产物可以作为末端转移酶的作用底物。 ---(判断题)
用外切酶III作系列缺失突变时，可以从突出的3’端开始。 ---(判断题)
nick和gap的含义是不同的，前者指DNA的单链中有较小的缺失，后者仅是断开了一个磷酸二酯键. ---(判断题)
现分离了4种新的大肠杆菌Hfr菌株，通过中断接合实验，针对每一菌株确定了高频转移的标记基因和它们进入F—受体的时间分别为： Hfr1 Hfr2 Hfr3 Hfr4 man 13min mal 29 lys 16 pur 6 标记基因和第一 trp 6 met 14 arg 9 trp 3 次进入的时间 his 23 thr 4 mal 2 thr 31 pur 3 uvr 20 his 32 lac 23 gal 14 (gal、lac、mal、man不能发酵半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖；arg、his、met、trp： 生长需要精氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、嘌呤和色氨酸；uvr： 紫外线敏感)。 任何没有给出的标记都是不能高频转移的。上述数据能够说明大肠杆菌的染色体 是环状的吗?以分钟表示图距构建一个大肠杆菌染色体的连锁图。假定整个染色 体用了100分钟转移，而且苏氨酸被认为位于0分钟或100分钟处。 ---(问答题)
T4 DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E.coli中分离的，这种连接酶( ) ---(选择题)
DNA连接酶在体内的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，( ) ---(选择题)
YAC克隆载体常出现哪些问题? ---(问答题)
在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( ) ---(选择题)
末端转移酶是合成酶类( ) ---(选择题)
在转导过程中，通常需要把受体菌和在供体中生长的噬菌体悬浮液分别铺在选择性培养基上，为什么? ---(简答题)
在以下关于噬菌体SP6RNA聚合酶特性的描述中，( )是不正确的。 ---(选择题)
如何将野生型的入噬菌体改造成为一个理想的载体? ---(简答题)
在基因工程中，可用碱性磷酸酶( ) ---(选择题)
用Sal I切割从噬菌体J2分离的DNA时，得到8个片段，分别是： 1.3、2.8、3.6、5.3、7.4、7.6、8.1和11.4kb。但是，用Sal I切割从被感染的寄主细胞中分离到的J2噬菌体DNA时，只得到7个片段，分别是： 1.3、2.8、7.4、7.6、8.1、8.9和11.4kb，根据这些结果，您得到哪些信息? ---(简答题)
从E.coli中分离的连接酶： ( ) ---(选择题)
在c I基因正常时为什么也会出现浑浊的噬菌斑?不正常则是清亮的噬菌斑? ---(简答题)
λ噬菌体DNA被包装到噬菌体的头部，需要哪些基本条件?为什么? ---(问答题)
为什么野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体? ---(问答题)
什么是蓝白斑筛选法? ---(问答题)
下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性 ---(选择题)
蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性？ ---(问答题)
下列哪一种酶作用时需要引物? ( ) ---(选择题)
什么是cI筛选法? ---(问答题)
EDTA是一种螯合剂，可以抑制大多数酶的活性，但在下列酶中，( )不受它的影响 ---(选择题)
S1核酸酶的功能是( ) ---(选择题)
λ噬菌体载体具有哪些优点与不足？ ---(问答题)
Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了( )的活性。 ---(选择题)
用Bal31核酸酶作系列缺失突变时，( ) ---(选择题)
什么是M13的IG序列区?有何特点和功能？ ---(问答题)
将野生型的M13改造成基因工程载体，首先是进行酶切位点的改造，请问M13中的EcoRI最初是如何引入的? ---(问答题)
在cDNA技术中，所形成的发夹环可用( ) ---(选择题)
以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体? ---(问答题)
λ外切核酸酶：( ) ---(选择题)
T4RNA连接酶： ( ) ---(选择题)
M13系列载体具有哪些优缺点? ---(问答题)
下列DNA不是λ外切核酸酶作用底物的是( ) ---(选择题)
黏粒载体具有哪些特点与不足? ---(问答题)
可以在切口部位起作用的酶是( ) ---(选择题)
辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的? ---(问答题)
基因工程中有三种主要类型的载体：（ ）、（ ）、（ ）。 ---(填空题)
由于不同构型的DNA插入的EB的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA的泳动速度（ ），OC DNA泳动速度（ ），L DNA居中，通过凝胶电泳和EB染色的方法可将不同构型的DNA分开。 ---(填空题)
质粒的复制象染色体的复制一样，是从特定的起点区开始的。然而，质粒的复制可以是（ ）向的，或是（ ）向的。在杂种质粒中，每个复制子的起点都可以有效的加以使用。但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。并认为：当某些具有低拷贝数的严禁型质粒与松弛型质粒融合后，在正常情况下（ ）的复制起点可能被关闭。 ---(填空题)
黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处。 ---(问答题)
什么是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种方法加尾?具有哪些优缺点? ---(问答题)
何谓接头连接法(linker ligation)? ---(问答题)
什么是同裂酶?为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高? ---(问答题)
如何使用甲基化酶对
